يعلم الجميع أن هناك العديد من المعامل، فكم من الأشخاص يعرفون عن مختبرات الـ PCR؟ وما هي المتطلبات الأساسية لتصميم مختبرات PCR؟ ثم سيكون هناك VOLAB Xiaobian للمناقشة مع الجميع ~
1، تخطيط مختبر PCR
ينقسم مختبر اختبار تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل من حيث المبدأ إلى أربع مناطق عمل منفصلة: منطقة تخزين الكاشف وإعداده، ومنطقة تحضير العينة، ومنطقة تحضير خليط تفاعل التضخيم ومنطقة التضخيم، ومنطقة تحليل منتج التضخيم. من أجل تجنب التلوث المتبادل-، يجب أن يتبع الدخول إلى كل منطقة عمل اتجاهًا واحدًا بدقة، أي فقط من منطقة تخزين الكاشف وإعداده ← منطقة تحضير العينة ← منطقة تحضير خليط تفاعل التضخيم ومنطقة التضخيم ← منطقة تحليل منتج التضخيم. ينبغي إجراء نقل الكاشف والعينة بين كل منطقة تجريبية من خلال نافذة النقل.
2. تصميم نظام تهوية وتكييف الهواء في المختبر والتحكم في الضغط
ليس لدى مختبرات تفاعل البوليميراز المتسلسل متطلبات تنقية صارمة، ولكن لتجنب احتمالية التلوث المتبادل-بين مناطق التجارب المختلفة، فمن المستحسن استخدام نظام توزيع هواء كامل التدفق-. وفي الوقت نفسه، يجب التحكم بشكل صارم في نسبة الإرسال والإرهاق لضمان متطلبات الضغط لكل منطقة تجريبية.
2.1 منطقة تحضير العينة
العمليات الرئيسية في هذا المجال هي الحفاظ على العينات، واستخلاص الأحماض النووية (RNA، DNA)، وتخزينها وإضافتها إلى أنابيب تفاعل التضخيم وتحديد تخليق الحمض النووي. متطلبات تدرج الضغط في هذه المنطقة هي: الضغط الإيجابي بالنسبة للمنطقة المجاورة لتجنب تلوث الهباء الجوي من المنطقة المجاورة إلى هذه المنطقة. بالإضافة إلى ذلك، نظرًا لاحتمال التلوث الناجم عن الهباء الجوي- أثناء عملية التحميل، يجب تجنب المشي غير الضروري في المنطقة.
2.2. منطقة تخزين الكاشف وإعداده
العمليات الرئيسية في هذا المجال التجريبي هي تحضير كواشف التخزين، وتوزيع الكواشف، وتحضير مخاليط التفاعل الرئيسية. يجب شحن الكواشف والمواد المستخدمة لإعداد العينات مباشرة إلى هذه المنطقة ويجب ألا تمر عبر مناطق أخرى. يجب تخزين المواد الخام الكاشفة في هذه المنطقة وإعدادها في المنطقة إلى كواشف التخزين المطلوبة. لا توجد متطلبات صارمة للتحكم في ضغط الهواء.
2.3، منطقة تحليل المنتج التضخيم
العملية الرئيسية في هذا المجال هي تحديد الأجزاء المضخمة. هذه المنطقة هي المصدر الرئيسي لتلوث المنتج المضخم. ولذلك فإن متطلبات تدرج الضغط لهذه المنطقة هي: الضغط السلبي بالنسبة للمنطقة المجاورة لتجنب انتشار المنتجات المتضخمة من المنطقة إلى مناطق أخرى.
2.4، تحضير خليط تفاعل التضخيم ومنطقة التضخيم
العملية الرئيسية في هذا المجال هي تضخيم الحمض النووي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضًا إجراء إضافة قالب الحمض النووي المُجهز (من منطقة تحضير العينة) وخليط التفاعل الرئيسي (من منطقة تخزين الكاشف وإعداده) لتحضير خليط التفاعل، وما إلى ذلك في هذه المنطقة. متطلبات تدرج الضغط في هذه المنطقة هي: الضغط السلبي بالنسبة للمنطقة المجاورة لتجنب تسرب الهباء الجوي من المنطقة. ومن أجل تجنب التلوث الناجم عن الهباء الجوي، ينبغي التقليل من المشي غير الضروري في المنطقة. ينبغي تنفيذ العمليات الفردية مثل أخذ العينات في مقاعد البدلاء النظيفة.
3.1. تقسيم صارم لمنطقة العمل
(1) إعداد كل منطقة تجريبية معقول؛
(2) يجب أن يكون لكل منطقة تجريبية علامات واضحة (مثل أرقام المنازل المذهلة أو ألوان الأرض المختلفة، وما إلى ذلك) لتجنب الخلط بين عناصر المعدات والكواشف في مناطق تجريبية مختلفة.
3.2، إعدادات النظام المعقولة
(1) إعداد نظام تهوية مكيف الهواء- المعقول، حاول استخدام نظام تكييف -إرسال الهواء- الكامل؛
(2) التحكم الصارم في ضغط تدفق الهواء يضمن متطلبات ضغط مختلفة في مناطق تجريبية مختلفة.
3.3، العملية القياسية
(1) يجب أن يقوم الفنيون في مختبر فحص التضخيم بإجراء-التدريب الوظيفي- ولا يمكنهم المشاركة في اختبارات تضخيم الجينات السريرية إلا بعد اجتياز التدريب؛
(2) أثناء التشغيل التجريبي، يجب على المشغل ارتداء القفازات واستبدالها بشكل متكرر. بالإضافة إلى ذلك، يعد استخدام الأغطية التي تستخدم لمرة واحدة أثناء التشغيل أيضًا إجراءً فعالاً لمنع التلوث؛
(3) أعمال التنظيف صحيحة وفي الوقت المناسب. وبعد الانتهاء من التجربة يجب تنظيف المنطقة على الفور. بالإضافة إلى سوائل التطهير التقليدية لتطهير الأسطح أو تشعيع وتطهير مصابيح الأشعة فوق البنفسجية، يجب أيضًا إخضاع بعض المعدات التجريبية للتعقيم بالضغط العالي.
3.4، إدارة صارمة
(1) فرض رقابة صارمة على الموظفين الذين يدخلون ويخرجون من المختبر. لا يجوز للأشخاص غير المرتبطين بالتجربة الدخول إلى المختبر أو الخروج منه حسب رغبتهم، وإذا لزم الأمر، يجب عليهم إنشاء ممرات وأبواب مستقلة من وإلى منطقة التجربة بأكملها.
(2) قلل من المشي غير الضروري في منطقة التجربة لتقليل احتمالية التلوث المتبادل-.
(3) تعد منطقة تحليل المنتج المضخم أهم مصدر لتلوث المنتج المضخم. لا يمكن إلقاء محلول النفايات في المختبر. ويجب نقعها في المحلول المطهر ثم التخلص منها في مكان بعيد عن المختبر. النصائح المستخدمة يمكن التخلص منها. وينبغي أيضًا تطهير المواد وتعقيمها ومن ثم معالجتها بشكل موحد، مثل الحرق؛
(4) قد تستخدم منطقة تحليل منتج التضخيم طفرات جينية معينة ومواد سامة، وينبغي إيلاء اهتمام خاص لحماية سلامة المجرب.
3.5. مرافق المختبر كاملة
تعد مرافق دعم المختبرات الكاملة شروطًا ضرورية لضمان العمل التجريبي. يجب تجهيز المعدات والأدوات المقابلة وفقًا للمحتويات التجريبية المختلفة لكل مختبر، مثل المقاعد فائقة النظافة -، وأجهزة الطرد المركزي، ومغذيات العينات.